3/1:50103
5.1.3. ЭФФЕКТИВНОСТЬ АНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ
Если лекарственный препарат не обладает достаточной собственной антимикробной
активностью, в его состав могут быть введены антимикробные консерванты, что особенно
важно для лекарственных препаратов в виде водных растворов. Поскольку микробное
загрязнение может вызвать инфицирование пациента или порчу лекарственного
препарата, антимикробные консерванты предназначены для предотвращения
размножения микроорганизмов или ограничения микробной загрязненности
лекарственного препарата в процессе хранения и применения, особенно в случае
использования многодозовых контейнеров. Антимикробные консерванты не должны
заменять выполнение требований надлежащей производственной практики.
Эффективность антимикробного консерванта может усиливаться или ослабляться в
результате взаимодействия с активным веществом или другими компонентами
лекарственного препарата, а также с упаковочными или укупорочными материалами.
Поэтому на протяжении срока хранения следует контролировать антимикробную
активность лекарственного препарата, хранящегося в контейнере, с целью доказательства
того, что она не снижается в процессе хранения. Для такого контроля могут быть
использованы образцы, извлеченные из контейнера непосредственно перед испытанием.
На стадии разработки лекарственного препарата следует доказать, что антимикробная
активность самого лекарственного препарата или, при необходимости, лекарственного
препарата с добавкой подходящего консерванта(ов) обеспечивает надлежащую защиту от
нежелательного воздействия, которое может быть результатом микробного загрязнения
лекарственного препарата или размножения в нем микроорганизмов в процессе хранения
и использования.
Испытание эффективности антимикробных консервантов может быть проведено в
соответствии с указаниями, приведенными ниже. Данное испытание не предназначено для
повседневного контроля.
ИСПЫТАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ
Для проведения испытания в лекарственный препарат, находящийся по возможности в
контейнере, вносят указанное ниже количество подходящих тест-микроорганизмов и
хранят инокулированные образцы при указанной температуре. Через определенные
промежутки времени из инокулированных образцов отбирают пробы и определяют в них
число микроорганизмов.
Эффективность консервантов в лекарственном препарате считают удовлетворительной,
если в условиях проведения испытания, при хранении инокулированных образцов при
заданной температуре в течение указанных промежутков времени наблюдается
значительное уменьшение или не наблюдается увеличения числа микроорганизмов в
зависимости от требований к лекарственному препарату. Критерии оценки,
показывающие уменьшение числа микроорганизмов за определенный период времени,
зависят от требуемой степени защиты лекарственных препаратов (Таблица 5.1.3.–1/2/3).
Тест-микроорганизмы
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 9027; NCIMB 8626; CIP 82.118.
Staphylococcus aureus
ATCC 6538; NCTC 10788; NCIMB 9518; CIP 4/83.
Candida albicans
ATCC 10231; NCPF 3179; IP 48.72/
Aspergillus brasiliensis
ATCC 16404; IMI 149007; IP 1431.83.
При испытании применяют один из перечисленных тест-микроорганизмов и, при
необходимости, используют также другие микроорганизмы, которые могут представлять
вероятное микробное загрязнение лекарственного препарата. Например, при испытании
всех лекарственных препаратов для приема внутрь рекомендуется использовать
Escherichia coli (ATCC 8739; NCIMB 8545; CIP 53.126), а при испытании лекарственных
препаратов для приема внутрь, содержащих высокие концентрации сахара ‒
Zygosaccharomyces rouxii (NCYC 381; IP 2021.92).
Приготовление посевного материала
При подготовке к проведению испытания свежевыращенную основную культуру каждого
из указанных тест-микроорганизмов пересевают на поверхность соево-казеинового агара в
случае выращивания бактерий (2.6.12) или агара Сабуро с декстрозой без добавления
антибиотиков (2.6.12) в случае выращивания грибов. Культуры бактерий инкубируют при
температуре от 30 С до 35 С в течение от 18 ч до 24 ч, культуру C. Albicans ‒ при
температуре от 20 С до 25 С в течение 48 ч, а культуру A. brasiliensis ‒ при температуре
от 20 С до 25 С в течение одной недели или до получения хорошо развитых спор. Для
достижения микроорганизмов его оптимального состояния могут потребоваться пересевы,
однако рекомендуется ограничиться минимально возможным их числом.
Для приготовления суспензий бактериальных культур и культуры C. Albicans микробную
массу смывают с поверхности питательной среды стерильной суспендирующей
жидкостью, содержащей 9 г/л натрия хлорида Р, и переносят в подходящий сосуд. Затем с
помощью той же жидкости доводят содержание микроорганизмов до 10
8
в миллилитре.
Для приготовления суспензии A. brasiliensis используют стерильную суспендирующую
жидкость, содержащую 9 г/л натрия хлорида Р и 0.5 г/л полисорбата 80 Р, и с ее
помощью доводят содержание спор до 10
8
в миллилитре.
Из каждой суспензии тотчас отбирают подходящий образец и определяют число
колониеобразующих единиц в 1 мл каждой суспензии методом посева на чашки или
методом мембранной фильтрации (2.6.12). Полученное значение служит для определения
числа жизнеспособных микроорганизмов в инокуляте и исходного числа
микроорганизмов при проведении испытания. Инокулят следует использовать тотчас
после приготовления.
МЕТОДИКА
Для подсчета жизнеспособных микроорганизмов в инокулированных образцах
используют ту же питательную среду, которая была использована для первоначального
выращивания соответствующих микроорганизмов.
Каждый контейнер с испытуемым лекарственным препаратом инокулируют суспензией,
содержащей один из тест-микроорганизмов, до концентрации от 10
5
КОЕ/мл до
10
6
КОЕ/мл или КОЕ/г лекарственного препарата. Объем суспензии инокулята должен
составлять не более 1 % от объема образца. Тщательно перемешивают для обеспечения
равномерного распределения микроорганизмов в образце.
Инокулированные образцы лекарственного препарата выдерживают при температуре от
20 С до 25 С в защищенном от света месте. Из каждого испытуемого образца отбирают
пробы (обычно 1 мл или 1 г) непосредственного после инокуляции и через указанные
интервалы времени определяют число жизнеспособных микроорганизмов методом посева
на чашки или методом мембранной фильтрации (2.6.12). Любую остаточную
антимикробную активность лекарственного препарата следует устранить путем
разбавления, фильтрации или с помощью подходящего инактиватора. При использовании
процедуры разбавления следует принимать во внимание снижение чувствительности
метода при определении малого числа жизнеспособных микроорганизмов. При
использовании инактиватора следует подтвердить путем контрольных опытов, что его
присутствие не влияет на жизнеспособность микроорганизмов. Необходимо подтвердить
пригодность методики для доказательства требуемого снижения числа жизнеспособных
микроорганизмов.
КРИТЕРИИ ПРИЕМЛЕМОСТИ
В таблицах 5.1.3.-1 ‒ 5.1.3.˗3 представлены критерии оценки антимикробной активности в
виде логарифма уменьшения числа жизнеспособных микроорганизмов в сравнении с их
количеством, содержавшемся в инокуляте.
Таблица 5.1.3.˗1. ‒ Лекарственные препараты парентеральные, глазные,
внутриматочные и интрамаммарные
lg уменьшения
6 ч
24 ч
7 сут
14 сут
28 сут
А
2
3
‒
‒
НВ
В
‒
1
3
‒
НУ
А
‒
‒
2
‒
НУ
В
‒
‒
‒
1
НУ
НВ ‒ не выявлены микроорганизмы
НУ ‒ не наблюдается увеличения числа микроорганизмов
Критерий А соответствует рекомендуемой эффективности консерванта. При обосновании
невозможности достижения критерия А, например, по причине повышенного риска
неблагоприятных воздействий, лекарственный препарат должен удовлетворять
критерию В.
Таблица 5.1.3.˗2. ‒ Лекарственные препараты ушные, назальные, для наружного
применения, для ингаляции
lg уменьшения
2 сут
7 сут
14 сут
28 сут
Бактерии
А
2
3
‒
НУ
В
‒
‒
3
НУ
Грибы
А
‒
‒
2
НУ
В
‒
‒
1
НУ
НУ ‒ не наблюдается увеличения числа микроорганизмов
Критерий А соответствует рекомендуемой эффективности консерванта. Если обосновано,
что критерий А не может быть достигнут, например, по причине повышенного риска
неблагоприятных воздействий, лекарственное средство должно удовлетворять
критерию В.
Таблица 5.1.3.-3. ‒ Лекарственные препараты для приема внутрь, оромукозальные и
ректальные лекарственные препараты
lg уменьшения
14 сут
28 сут
Бактерии
3
НУ
Грибы
1
НУ
НУ ‒ не наблюдается увеличения числа микроорганизмов
Приведенные критерии соответствуют рекомендуемой эффективности.